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实验操作模块

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分值

负染时间

封闭时间选择

敷一抗时间选择

敷二抗时间选择

室温孵育时间选择

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分值

（1）细胞传代的过程中，细胞置于培养箱中的培养条件为( )
A、37℃，5%湿润CO2
B、25℃，5%湿润CO2
C、37℃，8%湿润CO2
D、25℃，8%湿润CO2

（2）细胞冻存的过程中，如何进行细胞渐冻( )
A、按 4℃，30min；-80℃过夜的程序梯度缓慢降温
B、按-4℃，30min；-20℃，30min；-80℃过夜的程序梯度缓慢降温
C、按4℃，30min；-20℃，30min；-80℃过夜的程序梯度缓慢降温
D、按-4℃，30min；-80℃过夜的程序梯度缓慢降温

（3）外泌体提取过程采用差速超速离心法，取细胞上清于无菌50ml，离心管中4℃，300g离心10min，目的（）；取上清于无菌50ml，离心管4℃，2000g离心10min，目的（）；取上清于无菌50ml，离心管4℃，10000g离心30min,目的（）；取上清，使用无菌50ml注射器过（），目的（）；将离心后的培养基转入超速离心机专用的离心管中，超速离心（），小心吸去上清，沉淀中含（）；使用无菌预冷的PBS溶液轻轻吹打均匀使沉淀复溶，再次置于超速离心机专用离心管4℃，100000g离心70min，小心吸去上清，沉淀用无菌预冷的PBS重悬，轻柔吹打均匀使沉淀复溶，即得纯化外泌体。
① 外泌体和一些杂蛋白 ② 去除死亡细胞 ③ 去除游离细胞
④ 0.22μm 微孔滤膜 ⑤ 去除细胞碎片 ⑥ 4℃，100000g，离心70min
⑦ 除去离心后残留的大颗粒
A、③②⑤④⑦⑥① B、⑦②⑤④③⑥①
C、⑤②③④⑦⑥① D、②③⑤④⑦⑥①

（4）SDS-PAGE蛋白电泳，电泳参数设定（）进行浓缩胶电泳，之后改为电压（）进行分离胶电泳，直至溴酚蓝指示剂移至电泳槽底部，停止电泳，取出玻璃板，小心剥下凝胶，参照蛋白Mark，切取目标蛋白所在的条带。
① 120V、60min ② 80V、30min
A、①② B、②①

（5）Western-Blot转膜后进行封闭，条件为（），一抗的孵育条件为（），二抗孵育条件为（）。
① 室温封闭1h ② 摇床4℃孵育 4h ③ 摇床4℃孵育12h
A、①②③ B、①③② C、②①③ D、③②①

实验总结和反思